ELISA檢測(cè)試劑盒常見問(wèn)題及解決建議
Q1稱樣時(shí)，樣品是放在管底還是管口，如果放在管口對(duì)檢測(cè)結(jié)果有什么影響？
答：稱量過(guò)程中，樣本應(yīng)盡量稱量在試管底部，若樣本粘附在試管口，會(huì)使提取液不能與樣本充分接觸，造成提取不充分，從而影響檢測(cè)結(jié)果。
Q2是否可以將樣本提前稱量至離心管放置冰箱冷藏保存，待第二天實(shí)驗(yàn)使用？
答：建議冷凍保存，并注意避免交叉污染。
Q3吸取有機(jī)試劑時(shí)，有機(jī)試劑容易從槍頭滴落，如何避免？
答：吸取有機(jī)試劑應(yīng)使用刻度吸管或瓶口分液器。使用移液器吸取有機(jī)試劑會(huì)導(dǎo)致移液器的損壞，且吸取量不準(zhǔn)確。飽和蒸氣壓越大的液體（易揮發(fā)液體）越容易出現(xiàn)液滴低落的現(xiàn)象，若必須使用移液器吸取，可將槍頭與移液器緊密連接，減輕滴落現(xiàn)象的發(fā)生。
Q4前處理時(shí)，樣本離心5分鐘和離心10分鐘有什么區(qū)別？
答：樣本前處理的目的是去除雜質(zhì)以達(dá)到試劑盒能夠檢測(cè)的狀態(tài)，離心是去除雜質(zhì)的一種手段。離心可以分離液-液，液-固等非均一體系，離心的效果與需要分離的兩相性質(zhì)有很大關(guān)系：若固體樣本的顆粒較小不易分離，則離心所需時(shí)間較長(zhǎng)；若液體樣本與提取液極性相差較大且不易發(fā)生乳化，則離心所需時(shí)間較短。試劑盒說(shuō)明書中提到的離心時(shí)間是經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證所得到的，建議按照說(shuō)明書操作。
Q5離心轉(zhuǎn)速和離心力有什么區(qū)別？
答：離心轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力（RFC，單位g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（rpm，單位r/min）兩種表達(dá)方式，兩者換算公式為RFC=1.118*10-6*（rpm）2*r，其中r為旋轉(zhuǎn)半徑。維德維康試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的離心力為4000g，應(yīng)避免與4000r/min混淆。
Q6藥物殘留檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中對(duì)水質(zhì)的要求：三蒸水、蒸餾水、純凈水還是去離子水？
答：理論來(lái)說(shuō)這幾種水均可滿足分析要求，但對(duì)于某些項(xiàng)目有一定的區(qū)別。建議使用去離子水和三蒸水，蒸餾水和純凈水一般僅用于洗滌液的配置。
Q7器具污染所造成的原因有哪幾種？
答：①檢樣過(guò)程中出現(xiàn)含量較高的陽(yáng)性樣品；
②實(shí)驗(yàn)器具沒(méi)有清洗干凈；
③實(shí)驗(yàn)人員用藥污染或其他外源性污染；
④高濃度標(biāo)品儲(chǔ)備液保存不當(dāng)造成污染。
建議：易被污染或使用周期較長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)器具,定期（3-5個(gè)月）更新一次。
Q8同一個(gè)樣品檢測(cè)兩次，檢測(cè)值差異較大，可能是由于什么原因?qū)е碌模?/div>
答：正常情況下,板孔間的變異不會(huì)對(duì)樣本的檢測(cè)結(jié)果造成影響，可能造成此結(jié)果的情況有：
①某一實(shí)驗(yàn)操作前處理發(fā)生污染或失誤（稱樣量、添加樣品提取液或有機(jī)溶劑的量不準(zhǔn)確，渦動(dòng)離心提取上層清液時(shí)混入大量雜質(zhì)）；
②某一實(shí)驗(yàn)檢測(cè)分析過(guò)程出現(xiàn)失誤（添加樣品的量，酶或抗體的量，添加AB液或終止液的量不準(zhǔn)）。
Q9藥殘檢測(cè)時(shí)，樣品前處理過(guò)程中所用氮?dú)饪煞裼脡嚎s空氣代替？
答：一般情況下，需要檢測(cè)的目標(biāo)物是比較穩(wěn)定的藥物，可以用壓縮空氣代替氮?dú)狻Ｈ缬刑厥馑幬锟赡馨l(fā)生氧化影響檢測(cè)結(jié)果，則不可以使用壓縮空氣，具體藥物可向廠家咨詢。
Q10添加回收率實(shí)驗(yàn)中添加濃度如何選擇？
答：添加回收率是驗(yàn)證整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程準(zhǔn)確度的指標(biāo)之一。添加濃度的選擇盡量避免在zui低檢測(cè)限以內(nèi)或者超出試劑盒曲線外的濃度，建議參照目標(biāo)藥物在相應(yīng)樣品中的判定限、定量限或曲線中間范圍濃度。同時(shí)，需根據(jù)具體的添加濃度對(duì)所用高標(biāo)進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專ＷC添加量的準(zhǔn)確性。
添加回收的體積公式:V=C*1000M/P
其中:V為添加的高標(biāo)體積（μl），C為添加的濃度(ppb)，P為高標(biāo)的濃度(ppb)，M為樣本的質(zhì)量(g)。
Q11樣本的吸光度值為什么會(huì)超出曲線上zui大ＯＤ值？
答：①標(biāo)準(zhǔn)品回溫時(shí)間不夠；
②樣本中含有非樣本基質(zhì)的物質(zhì)，如有機(jī)溶劑；
③樣本復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或直接用去離子水作為復(fù)溶液；
④零標(biāo)品被污染；
⑤反應(yīng)時(shí)間錯(cuò)誤；
樣本的抑制率在100%-120%范圍內(nèi)，一般可以初步判斷樣本為陰性。若大部分樣本的抑制率遠(yuǎn)超過(guò)120%，建議咨詢或重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
Q12吹干步驟為什么選擇水浴或金屬浴?
答：有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)一般在60-90℃不等，為加快有機(jī)試劑的揮發(fā)，選擇水浴加熱或金屬浴加熱。加熱溫度應(yīng)根據(jù)待測(cè)化合物的性質(zhì)與提取試劑的沸點(diǎn)來(lái)確定，若待測(cè)化合物熱穩(wěn)定性好，不易降解或變性，可適當(dāng)提高氮吹溫度。建議使用說(shuō)明書中給出的溫度。
Q13回收率能否驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)過(guò)程及數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性？
答：一般用質(zhì)控樣品（已知濃度的樣品）的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)反映檢測(cè)的準(zhǔn)確性。在沒(méi)有質(zhì)控樣本對(duì)照的情況下，空白樣本添加回收率是對(duì)操作準(zhǔn)確性、操作環(huán)境及分析試劑的評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。因此，回收率也是實(shí)驗(yàn)成功與否的一個(gè)重要判定依據(jù)。
在ELISA檢測(cè)方法實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，回收率只是一個(gè)參考指標(biāo)，其值只要穩(wěn)定在一定范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果即具有參考性。
Q14同一個(gè)樣品，*次檢測(cè)顯示強(qiáng)陽(yáng)性，第二次檢測(cè)時(shí)卻顯示陰性，什么原因？
答：①點(diǎn)樣的過(guò)程中出現(xiàn)跳孔；
②板孔出現(xiàn)較大的變異系數(shù)；
③樣本在前處理過(guò)程中被污染；
④樣本混合不均勻。
建議出現(xiàn)高陽(yáng)性樣本時(shí)應(yīng)保留該樣本液，與重新處理好的樣本液一起點(diǎn)樣分析。
Q15同檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)陽(yáng)性應(yīng)該怎么處理？
答：應(yīng)及時(shí)進(jìn)行復(fù)檢工作。若檢測(cè)結(jié)果存在大面積陽(yáng)性，應(yīng)首先查找原因，并及時(shí)復(fù)檢。若復(fù)檢結(jié)果仍為陽(yáng)性應(yīng)及時(shí)保存該樣本，并使用儀器進(jìn)行確證；如復(fù)檢為陰性，則極大可能*次實(shí)驗(yàn)中存在污染或其他失誤導(dǎo)致假陽(yáng)性。
Q16冬天實(shí)驗(yàn)室溫度過(guò)低可否將試劑盒置于室溫保存？
答：不可以。冬天晝夜溫差的改變也會(huì)對(duì)試劑盒的性能造成不可逆的傷害，應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書規(guī)定保存。
Q17實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)白板如何排查問(wèn)題？
答：出現(xiàn)該問(wèn)題時(shí)要分情況解決：
1.標(biāo)準(zhǔn)曲線顯色正常，樣本均為陽(yáng)性：證明試劑盒性能正常，樣本遭到大面積污染或前處理過(guò)程出現(xiàn)重大失誤，建議重新取樣做復(fù)檢。
2.整板均不顯色或OD值很低：考慮酶和抗體取用錯(cuò)誤，點(diǎn)板過(guò)程過(guò)程中的污染（尤其是洗板過(guò)程）或廠家技術(shù)人員協(xié)助找到原因。
更新時(shí)間：2018-05-11 
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