Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱的使用說(shuō)明

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF（Strep-Tactin Berpharose FF）

1.      產(chǎn)品介紹

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF是一種將Strep-Tactin鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì)，主要用于純化Strep II標(biāo)簽蛋白。Strep II標(biāo)簽為8個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽（WSHPQFEK），由于標(biāo)簽小，僅為1kDa左右，一般不影響融合后蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，常用于融合表達(dá)蛋白質(zhì)的檢測(cè)和純化。

本產(chǎn)品的配基Strep-Tactin是鏈霉親和素（Streptavidin）的突變體，與鏈霉親和素相比，Strep-Tactin對(duì)Strep II標(biāo)簽的親和能力至少?gòu)?qiáng)10倍以上，能夠在溫和的條件下與Strep II融合蛋白結(jié)合和解離。由于Strep-Tacin對(duì)Strep II標(biāo)簽具有高度特異性，一般一步純化就能獲得高純度的蛋白質(zhì)樣品。

Strep II標(biāo)簽蛋白與凝膠結(jié)合后可使用脫硫生物素競(jìng)爭(zhēng)方式進(jìn)行洗脫，該洗脫方式比較溫和，一般不會(huì)影響蛋白質(zhì)的性質(zhì)。如蛋白質(zhì)能耐受一定的堿，也可用堿液洗脫，比如10mM NaOH等。Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF能耐受較高的堿清洗，可以用0.5M NaOH進(jìn)行再生清洗和去除熱源等。另外，2-(4-羥基苯唑)苯甲酸（HABA）也可用于凝膠再生，過(guò)量的HABA能夠競(jìng)爭(zhēng)下脫硫生物素，并且在無(wú)HABA的緩沖液中，能將凝膠上的HABA洗脫。

2.規(guī)格

1ml（預(yù)裝柱）、5ml（預(yù)裝柱）、10ml（預(yù)裝柱）、20ml、100ml、500ml

3.產(chǎn)品性能

4.純化流程

①推薦緩沖液

純化Strep II標(biāo)簽蛋白

結(jié)合緩沖液：100mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM EDTA，pH8.0；

或20mM NaH2PO4，280mM NaCl，6mM KCl，pH7.4

洗脫緩沖液：結(jié)合緩沖液+ 2.5mM脫硫生物素；

或10mM NaOH

再生緩沖液：0.5M NaOH；

或結(jié)合緩沖液+1mM HABA

②樣品準(zhǔn)備

上柱的樣品應(yīng)盡量保持與結(jié)合緩沖液一致。通常可用透析、超濾、稀釋等方法處

理樣品。并且上柱前應(yīng)過(guò)0.45μm濾膜或高速離心去除不溶物。

③樣品純化

（1）平衡：取適量的Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF裝入合適的層析柱中，用蒸餾

水清洗5個(gè)柱體積去除保存液，再用結(jié)合緩沖液平衡5個(gè)柱體積，建議流速為100cm/h。

（2）上樣：將準(zhǔn)備好的樣品上柱，建議流速為20-100cm/h，可根據(jù)實(shí)際結(jié)合情

況選擇流速，能獲得較好的效果。

（3）再平衡：上樣后用結(jié)合緩沖液平衡10個(gè)柱體積以上，或平衡至基線(xiàn)，洗去

雜質(zhì)，推薦流速為100cm/h。

（4）洗脫：用洗脫緩沖液洗10-20個(gè)柱體積，建議流速為100cm/h，收集的洗脫

液應(yīng)立即調(diào)節(jié)pH至穩(wěn)定范圍，并根據(jù)需要置換緩沖液。

（5）NaOH再生：洗脫目的蛋白后的柱子用蒸餾水清洗3-5個(gè)柱體積，并用0.5M

NaOH再生3-5個(gè)柱體積，再用蒸餾水清洗至中性，用20%乙醇保存柱子，或進(jìn)行下

一次純化。

（6）HABA再生：用脫硫生物素洗脫目的蛋白的，還可以用HABA緩沖液再生，

一般用HABA的結(jié)合緩沖液洗15個(gè)柱體積，再用結(jié)合緩沖液洗30個(gè)柱體積，然后可

以用20%乙醇保存柱子，或進(jìn)行下一步純化。HABA上柱后凝膠顏色會(huì)變?yōu)榧t橙色，

在結(jié)合緩沖液平衡后會(huì)恢復(fù)正常的白色，這種再生方式一般使用體積會(huì)大些。

5.注意事項(xiàng)：

1)使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響純化效果。

2)本產(chǎn)品保存條件為20%乙醇，4~8℃。

3) 2-25℃,常壓,避光運(yùn)輸

4）僅供科研實(shí)驗(yàn)使用

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