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產(chǎn)品分類TECHNICAL ARTICLES
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上海信帆生物提供WB實驗代測服務(wù)，代測時間為7-10天，提供實驗數(shù)據(jù)，包括所有試劑，提供分析數(shù)據(jù)、步驟等，如果你想了解該實驗服務(wù)的詳細(xì)信息，咨詢！
產(chǎn)品型號：廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家更新時間：2024-10-18訪 問 量：34528
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所有產(chǎn)品僅供科研使用，不能用于食用和醫(yī)療等
Western Blotting檢測,WB實驗代測，WB實驗服務(wù)
Western blot樣本要求
客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品， 檢測目的蛋白的一抗（或由本公司代購）。樣品要求為：
1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。
2、細(xì)胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。
3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。
Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供
內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張，可提供掃描圖，實驗報告，包括整個試驗流程所涉及的實驗數(shù)據(jù)和實驗步驟。如需進(jìn)行蛋白純化服務(wù)，將提供檢測報告
WB實驗代測
服務(wù)內(nèi)容
我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測的全流程服務(wù)，如需要還可進(jìn)行灰度分析。
說明
1、建議提供目的蛋白陽性表達(dá)樣品（純蛋白或有陽性表達(dá)的細(xì)胞或組織）作為陽性對照。
2、每張膜檢測1-8個樣品。
3、如果一抗由客戶提供，請在正確條件下保存，避免污染及反復(fù)凍融。
關(guān)于Western blot實驗異常分析
『無信號』
| 原因 | 建議 |
| 一抗與二抗不匹配 | 選擇針對一抗來源種屬制備的二抗； |
| 一抗不識別目的的種屬的蛋白 | 1)檢查抗體的說明書，適用范圍內(nèi)是否包含目的種屬 |
| 一抗或二抗不足，沒有足夠的抗體結(jié)合到目的蛋白 | 1)降低抗體稀釋倍數(shù)，增加抗體濃度 |
| 封閉劑與一抗有交叉反應(yīng) | 改變封閉劑 |
| 抗原不足 | 1)每個泳道加入20-30ug總蛋白 |
| 在檢測的組織內(nèi)目的蛋白表達(dá)水平低 | 檢測樣本不表達(dá)目的蛋白選擇表達(dá)量高的細(xì)胞作為陽性對照，用于確定檢測樣本是否為陰性，也可更換細(xì)胞系 |
| 蛋白轉(zhuǎn)膜效率低 | 1)利用麗春紅檢測轉(zhuǎn)膜效率;檢查轉(zhuǎn)移裝置是否電極弄反 |
| 膜過渡洗滌 | 減少洗滌時間和強度 |
| 疊氮鈉抑制二抗活性 | 二抗稀釋液內(nèi)不用疊氮鈉 |
『沒有特異條帶』
| 原因 | 建議 |
| 細(xì)胞系傳代過多后蛋白表達(dá)譜發(fā)送變化 | 1)使用未傳代或傳代次數(shù)較少的細(xì)胞系進(jìn)行樣品制備 |
| 蛋白本身有很多修飾 | 1)查閱文獻(xiàn)，確定目的蛋白是否存在多種修飾 |
| 蛋白被消化或者降解 | 1)蛋白樣品確保未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑 |
| 所檢測蛋白存在多種剪接體，導(dǎo)致分子量大小不同 | 1)查閱文獻(xiàn)或者通過搜索數(shù)據(jù)庫來確定該蛋白是否存在多種長度不同的編碼mRNA |
| 一抗或二抗?jié)舛雀?/span> | 1)減低抗體濃度 |
| 洗滌不夠 | 1)充分洗滌 |
『條帶大小不正確』
| 原因 | 建議 |
| 目的蛋白被降解 | 確保蛋白樣品未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑 |
| 存在不同的剪接體 | 查閱文獻(xiàn)或者通過搜索數(shù)據(jù)庫來確定該蛋白是否存在多種長度不同的編碼mRNA |
| 重組蛋白 | 檢測是否存在額外加入的蛋白 |
| 特殊蛋白如MDM2等 | 仔細(xì)閱讀抗體說明書 |
尊敬的客戶：
本公司有放射免疫技術(shù)服務(wù)、蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)、免疫組化、PCR技術(shù)服務(wù)、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析等，如果您想了解Western blot的更多內(nèi)容或者其他服務(wù)信息，您可以本公司的了解更多產(chǎn)品的詳細(xì)信息，至善至美的服務(wù)是我們永無止境的追求，歡迎新老客戶放心選購自己心儀產(chǎn)品，我們將竭誠為您服務(wù)！
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